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本产品是spCas9 Nuclease的一个突变体。Cas9 Nuclease具有两个切割活性中心，从而实现在sgRNA靶序列特定位点引入DNA双链断裂（DSB）。NLS-Cas9（D10A）Nickase在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心，其能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，并且通过在蛋白两端加了核定位序列(NLS)，可把蛋白送到细胞核内进行基因组编辑，配合一对gRNA使用，可实现Cas9 Nuclease相同的基因编辑效果，由于有效的识别序列由20bp增加至40bp，可明显减少意外的脱靶基因修饰，从而显著提高CRISPR/Cas9技术基因修饰的特异性。


CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，改造后的II型CRISPR/Cas9系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目前CRISPR/Cas9技术应用的一个难题，在基因编辑应用中，可能会出现难以预测的后果。

• 纯蛋白体系，避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰；
  
• 可显著降低脱靶效应。

• 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除；
  
• 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入；
  
• sgRNA剪切靶点DNA效率检测，降低体内筛选成本；
  
• 体外剪切靶DNA的特异位点。

图1．Cas9 D10A Nickase DNA切割活性检测，50～100ng酶可有效切割cccDNA（>95%）。
cccDNA：带有靶位点的超螺旋DNA。
ocDNA：酶切产生切刻后的开环DNA。

组分	规格
NLS-Cas9（D10A）Nickase(0.1μg/μL)	500μL
10×Reaction Buffer	1mL

保存：-20℃


10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol，PH7.4@25℃。

• 经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达95%；
  
• 内毒素含量<0.1 EU/μg；
  
• qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留；
  
• 无RNase、核酸内、外切酶污染。

• 按下表加入各成分配制20μL体外切割体系：
  

  成分	用量
  Supercoiled DNA	200ng
  sgRNA	200ng
  NLS-Cas9（D10A）Nickase	50～100ng
  10×Reaction Buffer	2μL
  RNase Free Water	至20μL

  
  注：在反应体系中可添加RNase Inhibitor至1U/μL，防止RNase污染。
  
• 37℃反应1小时。
  
• 70℃加热10分钟。

货号	名称	说明
JN0065	NLS-Cas9 Nuclease
JN3003	Cas9 D10A Nickase	能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3004	Cas9 H840A Nickase	能在与sgRNA靶序列非互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3005	Cas9(D10A,H840A)Nuclease	为Cas9 D10A和H840A双突变失活酶，具有靶DNA结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。

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